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生化实验室15大常识


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生化实验室15大常识


标签 离心机 移液器 灭菌 cc 克隆载体 


[导读] 生化实验室15大常识。


  1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇?


  保存在冰箱中的酚,容易被空气氧化而变成粉红色,这样的酚容易降解DNA,一般不可以使用。为了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫,不仅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。


  2.如何将不同构型的质粒DNA区别开?


  由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同,cccDNA的泳动速度最快,通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。


  3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么?


  异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。


  4.用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子?


  用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl或NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀。


  5.在提取RNA时经常使用异硫氰酸胍,有什么作用?


  RNA是一种极易降解的核酸分子。高浓度强变性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏,使RNA从细胞中释放出来。同时高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的RNA酶失活,使释放出的RNA不被降解。


  6.蛋白印迹中封闭液的作用?


  封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位,以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。


  7.DNA通常保存在什么缓冲液中?


  采用TE缓冲液,Tris-HCl的缓冲系统,加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性,对DNA起到保护作用。


  8.在酶切反应缓冲液中为什么加入BSA?


  通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。


  9.简单的克隆载体必需包括什么?


  复制起点;选择标记:主要是抗性基因;多克隆位点:便于外源DNA的插入。


  10.用酚抽提细胞DNA时,有什么作用?


  使蛋白质变性。


  11.在分离DNA时,要使用EDTA,为什么?


  EDTA是金属离子螯合剂,螯合二价离子,抑制核酸酶的活性。


  12.在分离DNA过程中,造成DNA分子断裂的因素有哪些?


  核酸酶降解;化学降解;物理剪切。


  13.使用离心机应注意什么?


  首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管,使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守,发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。


  14.分子生物学实验室常用的灭菌方法有哪些?


  高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学药剂消毒、过滤除菌。


  15.使用移液器有哪些注意事项?


  垂直吸液、慢吸慢放;选择合适的量程范围,不能超过量程使用;选择与移液器匹配的枪头,安装枪头时不要用力太猛;移液器每日用完后,应旋到最大刻度。


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