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牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化


实验试剂

 

牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等

 

实验设备

 

试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高压蒸汽**锅等

 

实验步骤

 

1. 牛肉膏蛋白胨培养基的制备

   1) 计算  根据配方计算出实验中各种药品所需要的量,然后再分别称量。

   2) 称量  准确称取各种成分。一些不易称量的成分如牛肉膏,可用玻璃棒取出放硫酸纸上称量,然后连同硫酸纸一起放入烧杯中。

   3) 溶解  向烧杯内加入所需的水量,将牛肉膏用水洗下后,取出硫酸纸弃去。加热搅拌全溶后稍放冷。

   4) 调pH值  用酸度计或精密pH试纸测定其pH值,并用10%NaOH调至所需pH值,必要时用滤纸或脱脂棉过滤。一般比要求的pH高出0.2,因为高压蒸汽**后,pH常降低。

   5) 分装  根据不同需要,可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内(附图1-1)。注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。如液体培养基,应装试管高度的1/4左右;固体培养基装试管高度的1/5左右;装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。

   6) 包扎  试管扎成捆。试管和三角瓶的棉塞外用硫酸纸和牛皮纸包扎,纸上表明培养基的名称、配制日期等。

   7) **  培养基用0.1Mpa(15lb/in2)高压蒸汽**15~20min,

2. 培养基的高压蒸汽**

**原理:水的沸点可随压力的增加而提高,当高压蒸汽**锅中水煮沸时,因锅是密闭的,蒸汽不能溢出,而使压力增加,水的沸点和温度也随之增加。因此,高压蒸汽**是利用高压蒸汽产生的高温,以及热蒸汽的穿透能力来达到**的目的。一般在0.1Mpa(15lb/in2)的压力时,温度可达121℃只要维持15~20min,就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。

**方法:

   1) 加水于**器内到规定的水平面。

   2) 需**的物品(分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基),棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好(防止锅内水汽把棉塞淋湿),放入**锅内的套筒中。摆放要疏松,不可太挤,否则阻碍蒸汽流通,影响**效果。

   3) 将**锅盖的排气管插人套筒侧壁的凹槽内,关闭**锅盖旋紧螺栓,切勿漏气。

   4) 打开放气阀,加热,热蒸汽上升,以排除锅内冷空气,排气约5~ l0min,关闭放气阀。

   5) 关闭放气阀后,整个**锅成为密闭状态,而蒸汽又不断增多,这时压力和温度都上升,直至压力表指针达到所需压力时,开始计时,通过调节热源,维持此压力到所需时间。

   6) **完毕,待压力自然降至0时,打开放气阀,注意不能打开过早,否则突然降压致使培养基冲腾,使棉塞、硅胶泡沫塞沾污,甚至冲出容器以外。

   7) 打开**锅盖,取出已**的器皿及培养基。

   8) **锅用完后,将锅内剩余的水倒掉,以免日久腐蚀。

3. 微生物的分离与纯化

借助于划线将混杂的细菌材料逐步稀释,*后在琼脂平板上分散开来,使之出现单一菌落而达到分离纯化的目的。

 

注意事项(牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化)

 

1. 要严格按配方配制。

2. 调pH不要过头。

3. 高压**要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物。

4. 划线法分离纯化微生物注意各区勿相互交叉。

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